عملکرد دستگاه اتوکلاو بیمارستانی :
پس از قرار دادن تجهیزات داخل محفظه درونی (Chamber) و بستن درب اتوکلاو ، مقداری هوا داخل آن باقی می ماند که باید توسط پمپ های وکیوم تخلیه شود. علت آن این است که هوای گرم در مقایسه با بخار به مدت زمان زیادی برای استریل کردن نیاز دارد . برای مثال : بخار در دمای ۱۳۴ درجه سانتی گراد به ۳ دقیقه وقت برای استریل کردن مواد نیاز دارد در حالی که هوای گرم ۱۶۰ درجه سانتی گراد در همان شرایط به دو ساعت وقت نیاز دارد.
سپس بخار آب تولید شده در اتوکلاو بیمارستانی توسط منبع مولد بخار، وارد محفظه بیرونی(Jacket) می شود و پس از آنکه فشار و دمای آن به مقدار مشخصی رسید، وارد محفظه درونی (Chamber) می شود و تمام تجهیزات موجود در آن را در مدت زمان مشخصی استریل می‌کند. سپس از طریق لوله خروج (Exhaust pipe) از قسمت پایین دستگاه خارج می‌شود.به منظور خشک کردن تجهیزات، هوا و بخار آب داخل محفظه درونی (Chamber) از طریق پمپ وکیوم تخلیه می شود و در مرحله آخر با ورود مجدد هوا به محفظه درونی (Chamber) فشار آن با فشار بیرون برابر می شود.
در طول این فرآیند یک قفل محکم از خروج بخار محفظه درونی (Chamber) جلوگیری می‌کند و یک شیر کنترل کننده فشار درون محفظه را کنترل می‌کند.
معمولا زمان موردنیاز برای فرآیند استریلیزاسیون و از بین بردن بیشتر میکروارگانیسم‌ها حداقل ۳ دقیقه و حداکثر۲۰-۱۵ دقیقه است. زمان دقیق استریل کردن وابسته به اندازه تجهیزات و میزان آلودگی آنها و همچنین جریان بخار موجود در اتوکلاو است.
برخی از اتوکلاو بیمارستانی از گازهای دیگر به جای بخار برای انجام واکنش‌های شیمیایی خود استفاده کنند.